猫瘟，又称猫泛白细胞减少症，是由猫细小病毒（FPV）引起的一种急性、高传染性的病毒性疾病。各年龄段的猫咪均有可能发病，其中以幼猫感染情况最为严重，感染率可达70%，死亡率为50%-60%，5月龄以下的幼猫死亡率最高可达80%-90%。所谓的“星期猫”就是由于猫瘟病毒有2-9天的潜伏期，看似健康的幼猫，可能已经感染猫瘟病毒，在被接回家中1周后开始发病。

图片源自网络

疫苗是首要的预防方式，当幼猫在6-8周龄时就能够施打核心疫苗（三联疫苗）来预防以上三种传染病。猫三联是一种三联灭活疫苗，专门针对猫瘟、猫杯状病毒病、猫鼻支这三种传染疾病，猫咪第一年打猫三联需要注射三次，之后每年加强免疫一针。

灭活疫苗是对病毒或细菌进行培养后通过物理或化学方法处理将其灭活从而获得无感染活性的一类疫苗。相较于减毒疫苗和基因工程疫苗，灭活疫苗具有研发周期短、制备工艺相对成熟、无感染毒力和安全性高等优点。灭活疫苗的生产工艺流程主要包括病原体的培养、病原体的灭活、病原体的提取和纯化、疫苗的配制和包装、疫苗的质量控制5个步骤，本篇文章主要介绍疫苗的下游纯化方案。

在细胞培养生产出的各种病毒液中，除了含有大量病毒颗粒以外，还存在许多细胞组织碎片及代谢产物等杂质，使得病毒液呈现混浊或半混浊状态，如果直接用这种病毒液进行浓缩操作，将会很快使超滤膜阻塞，而无法完成病毒液的浓缩，并致使超滤膜报废。因此，病毒液在浓缩之前，首先必须进行澄清处理，去除病毒液中的大颗粒杂质，使其成为半透明或透明溶液，用这样的病毒液进行浓缩，才可能使浓缩过程正常进行，确保超滤膜的使用寿命。病毒液浓缩前的澄清处理是浓缩过程中一个关键的技术环节。

高效的澄清步骤需要兼具较高的固体颗粒去除能力以及较高的产品收率、易于放大、并且能够保护后期下游操作装置。目前生产上多使用0.3-0.4μm深层膜堆或0.8μm滤芯进行澄清操作。

Guidling深层膜堆、折叠滤芯完全满足疫苗下游澄清步骤；我们众多产品生产线，从小型一次性实验室过滤到生产型过滤系统、无菌检测、发酵、细胞培养等，能够满足试验与生产的各项需求。

初步澄清后，病毒液中还是会存在大量杂蛋白及细胞碎片，如果不进行去除，不仅会对疫苗的疗效造成影响，还有可能会引起过敏或其他不良反应，甚至导致接种动物死亡。因此，需要进行浓缩纯化，以去除杂蛋白、细胞碎片等杂质，增强诱发有效的免疫应答，减少疫苗使用量，减少不良反应。

目前应用于大规模生产的浓缩纯化方法主要是超滤。

超滤法，主要使用切向流超滤装置、中空纤维过滤系统等过滤设备，一般情况下，应用超滤法可使病毒浓缩100倍以上，杂蛋白去除率达99%。其中，中空纤维膜过滤技术具有温和低剪切力、不易堵塞、操作灵活、寿命长成本低、易于放大等优点，因此浓缩纯化病毒建议选择中空纤维。

使用超滤法进行浓缩纯化，选择合适的膜孔径至关重要，膜孔径直接决定了浓缩的效率和产品质量。一方面需要选择膜孔径能够使目标分子有效截留以保证收率，另一方面要充分考虑杂蛋白的去除效果和处理速度。因此最佳的原则为：选择可以截留目标分子的孔径最大的膜，并且尽量选择孔径分布均一的滤膜。

猫疱疹病毒（FHV）属于大型病毒，粒子直径100-160nm；猫嵌杯状病毒（FCV）为单链RNA病毒，粒子直径 30-40nm；猫细小病毒（FPV）属于细小病毒科细小病属，是一种单股正链DNA病毒，粒子直径 20-35nm。

对于猫疱疹病毒（FHV），一般宿主蛋白大约在60kd左右，而猫疱疹病毒（FHV）粒径大小在100-160nm，故而，使用300kd超滤膜包或中空纤维可完成截留猫疱疹病毒（FHV），并去除杂蛋白。对于猫嵌杯状病毒（FCV）及猫细小病毒（FPV），由于这两个病毒的粒径大小与宿主蛋白相差不大，建议使用层析法。

九龄科技膜包采用医学级惰性材料，具有极强的抗腐蚀性能，可耐强碱清洗；采用自动化的制造工艺，确保产品的连续性和质量可靠性，更高的机械强度、耐反压能力和反复冲洗性能；具有超强的亲水性，能赋予膜更高的通量，更低的蛋白吸附；我们还有优化的流道设计，具有更小的压力降，便于物料传递，显著缩短过滤时间。

我们的膜包提供多种规格的膜孔径，有从1kd到1000kd的超滤膜包。其中，1-10kd超滤膜包可用于脱盐、除热原；30kd超滤膜包可用于单抗的浓缩和置换缓冲液；同时，我们的中空纤维产品同样可用于生物制品的浓缩和置换，膜孔径100kd、300kd、500kd主要在疫苗类产品中大量应用。

层析法，此法是依据病毒对离子交换树脂及类似的其他吸附剂具有亲和性而被吸附，并能被适当浓度的离子溶液洗脱下来的原理。利用吸附剂的层析法分为两种：一种是正吸附，即病毒粒子被吸附，然后用适当浓度的离子溶液将病毒粒子解离回收；另一种是负吸附，即只吸附组织或宿主细胞成分等非病毒蛋白，而回收病毒粒子。用于层析的病毒样品应是低速或高速离心后的病毒悬浮。常用的方法有：凝胶层析法、离子交换纤维素柱层析法、免疫亲和层析法。层析法得到的病毒滤液，都要用高速离心沉淀或用聚乙二醇除去水分浓缩。