超滤离心管是一种实验室常用的分离和纯化生物样品的器具,以其快速超滤功能脱颖而出。它能够达到高浓缩倍数,轻松从稀释或复杂的混合样本中回收目的产物。超滤离心管主要用于生物样品(如蛋白质、核酸、病毒等)的浓缩、脱盐和分离。它通过离心力驱动样品通过超滤膜,根据分子量大小实现分离。
如何选择及使用超滤离心管?大部分客户有这样的困扰。许多客户对超滤离心管知之甚少,但却经常使用透析袋,经过了解后会发现,超滤离心管往往能在短短几十分钟内完成透析袋一整天的任务。
使用方法
选择合适规格:通常选择比目标分子量小2-6倍的膜孔径。认真阅读使用说明书,注意超滤膜对各种化学物质的耐受程度有所不同。
预处理:新购的超滤离心管的超滤膜含有微量甘油,使用前需要用纯水或缓冲液浸泡并置于冰箱预冷10分钟。之后倒出纯水,再将超滤管置于冰上预冷2-5分钟。如果干扰仍然存在,可用0.1M NaOH清洗,再用纯水清洗并甩干。注意:超滤离心管中的滤膜一旦润湿后应避免变干。如果在预清洗后不是立即使用,则让液体保留在滤膜上,直到使用。
加样:如超滤管中有少许残留水,可将超滤管内管倒置1000×g离心1分钟,移液枪移取适量样本加入超滤管中。在加入样品时,需注意不得超过超滤管滤芯的最大体积。
平衡:质量和重心二者都要达到平衡。必须确保配对的超滤管质量与重心平衡,且滤芯的放置位置和方向必须一致,以确保各平行样品浓缩倍数的一致性。
离心:配平后,以5000×g离心15-40分钟,具体时间取决于所使用超滤管的MWCO。注意转速和加速度不可太快,否则直接损坏超滤膜。
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样本收集:离心后,大分子留在上层,小分子和溶剂通过膜进入下层。外管滤液为小分子物质和溶剂;内管液体为大分子物质,如需收集大分子物质,则另取外管,内管倒置1000×g离心1-2分钟。
清洗:若一次性使用,直接丢弃即可。若需重复使用,使用完的超滤管用纯水反复清洗5次,再用0.1M NaOH浸泡1-2小时,随后用20%乙醇清洗,并用超纯水或缓冲液清洗3次。一般不建议重复使用超滤管超过5次。
短时间保存:用0.1M NaOH浸泡1-2小时,纯水清洗3次,然后用75%乙醇浸泡,务必使滤膜保持湿润,不能长菌。
长时间保存:用0.1M NaOH浸泡1-2小时,纯水清洗3次,然后用20%乙醇浸泡,务必使滤膜保持湿润,不能长菌。
除盐或渗滤操作:
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注意事项
1. 避免膜堵塞,样品需预处理去除颗粒物。
2. 定期检查浓缩进度,防止样品过度浓缩,影响收率。
3. 超滤管最大离心力不能超过8000×g,否则会导致滤膜破损或样品损失。
4. 超滤样本会损失十分之一至五分之一的样本量,主要取决于样本中蛋白含量。
5. 若管底有可见的蛋白沉淀,可以先加入纯水,然后用枪头吹打,注意不要碰到膜,吹打至沉淀悬起,然后倒掉,不可用自来水猛冲。
6. 防止污染,操作时保持无菌,避免样品污染。
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